高效液相色譜HPLC應(yīng)用主要分為：樣品測(cè)定與方法研究，本文從這兩方面著重介紹HPLC的應(yīng)用。

高效液相色譜HPLC應(yīng)用主要分為：樣品測(cè)定與方法研究，本文從這兩方面著重介紹HPLC的應(yīng)用。

一、樣品測(cè)定

1．流動(dòng)相比例調(diào)整：由于我國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有規(guī)定柱的長(zhǎng)度及填料的粒度，因此每次新開(kāi)檢新品種時(shí)幾乎都須調(diào)整流動(dòng)相（按經(jīng)驗(yàn)，主峰一般應(yīng)調(diào)至保留時(shí)間為6~15分鐘為宜）。所以建議第一次檢驗(yàn)時(shí)請(qǐng)少配流動(dòng)相，以免浪費(fèi)。弱電解質(zhì)的流動(dòng)相其重現(xiàn)性更不容易達(dá)到，請(qǐng)注意充分平衡柱。

2．樣品配制：①溶劑；②容器：塑料容器常含有高沸點(diǎn)的增塑劑，可能釋放到樣品液中造成污染，而且還會(huì)吸留某些藥物，引起分析誤差。某些藥物特別是堿性藥物會(huì)被玻璃容器表面吸附，影響樣品中藥物的定量回收，因此必要時(shí)應(yīng)將玻璃容器進(jìn)行硅烷化處理。

3．記錄時(shí)間：第一次測(cè)定時(shí)，應(yīng)先將空白溶劑、對(duì)照品溶液及供試品溶液各進(jìn)一針，并盡量收集較長(zhǎng)時(shí)間的圖譜（如30分鐘以上），以便確定樣品中被分析組分峰的位置、分離度、理論板數(shù)及是否還有雜質(zhì)峰在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)才洗脫出來(lái)，確定是否會(huì)影響主峰的測(cè)定。

4．進(jìn)樣量：藥品標(biāo)準(zhǔn)中常標(biāo)明注入10ml，而目前多數(shù)HPLC系統(tǒng)采用定量環(huán)（10ml、20ml和50ml），因此應(yīng)注意進(jìn)樣量是否一致。（可改變樣液濃度）

5．計(jì)算：由于有些對(duì)照品標(biāo)示含量的方式與樣品標(biāo)示量不同，有些是復(fù)合鹽、有些含水量不同、有些是鹽基不同或有些是采用有效部位標(biāo)示，檢驗(yàn)時(shí)請(qǐng)注意。

6．儀器的使用：

①流動(dòng)相濾過(guò)后，注意觀察有無(wú)肉眼能看到的微粒、纖維。有請(qǐng)重新濾過(guò)。

②柱在線時(shí)，增加流速應(yīng)以0.1ml/min的增量逐步進(jìn)行，一般不超過(guò)1ml/min，反之亦然。否則會(huì)使柱床下塌，叉峰。柱不線時(shí)，要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率遞增上去（或下來(lái)），勿急升（降），以免泵損壞。

③安裝柱時(shí)，請(qǐng)注意流向，接口處不要留有空隙。

④樣品液請(qǐng)注意濾過(guò)（注射液可不需濾過(guò)）后進(jìn)樣，注意樣品溶劑的揮發(fā)性。

⑤測(cè)定完畢請(qǐng)用水沖柱1小時(shí)，甲醇30分鐘。如果第二天仍使用，可用水以低流速（0.1~0.3ml/min）沖洗過(guò)夜（注意水要夠量），不須沖洗甲醇。另外需要特別注意的是：對(duì)于含碳量高、封尾充分的柱，應(yīng)先用含5~10%甲醇的水沖洗，再用甲醇沖洗。

⑥沖水的同時(shí)請(qǐng)用水充分沖洗柱頭（如有自動(dòng)清洗裝置系統(tǒng)，則應(yīng)更換水）。

二、方法研究

1．波長(zhǎng)選擇：首先在可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)上測(cè)量樣品液的吸收光譜，以選擇合適的測(cè)量波長(zhǎng)，如最靈敏的測(cè)量波長(zhǎng)并避開(kāi)其它物質(zhì)的干擾。從紫外光譜中還可大體知道在HPLC中的響應(yīng)值，如吸收度小于0.5時(shí)，HPLC測(cè)定的面積將會(huì)很小。

2．流動(dòng)相選擇：盡量采用不是弱電解質(zhì)的甲醇-水流動(dòng)相。

上一篇: 聯(lián)系我們

下一篇: 企業(yè)微博加V成功