發(fā)布時間: 2013-07-21 人氣指數(shù): 4270
YMC公司在 YMC-BioPro 離子交換色譜柱的制造過程中進行了嚴格的質(zhì)量管理,保證能為客戶提供最高品質(zhì)的產(chǎn)品。為了使供給您的色譜柱最大地發(fā)揮其性能并能夠長時間地被正確使用,請認真閱讀YMC-BioPro說明書.
YMC-BioPro離子交換色譜柱是在新開發(fā)的親水性聚合物上引入了強陽離子交換基(第四級氨基)/強陰離子交換基(硫代丙基)的,最適合于蛋白質(zhì)、核酸分離的色譜柱。由高分離、高吸附量的多孔型YMC-BioPro QA / SP和適用于超高速、高分離的非多孔型YMC-BioPro QA-F / SP-F所組成。
一、YMC-BioPro離子交換色譜柱在制造過程中進行了嚴格的質(zhì)量管理,保證能為客戶提供最高品質(zhì)的產(chǎn)品。為了使供給您的色譜柱最大地發(fā)揮其性能并能夠長時間地被正確使用,請認真閱讀YMC-BioPro說明書。
二、YMC-BioPro基本規(guī)格
三、YMC-BioPro的連接及系統(tǒng)設(shè)定注意事項
?色譜柱的連接采取了與waters的產(chǎn)品為互換共用形式。在配管的連接部分如有空隙,可能會引起漏液或色譜柱的性能(理論塔板數(shù),峰的對稱性)下降。因此要注意配管的法蘭尖端長度和橫截面,以免造成不必要的空隙。
?為了降低系統(tǒng)流路中的樣品擴散(柱外擴散),進樣器和色譜柱,以及色譜柱和檢測器之間的配管盡可能的短一些,并請使用內(nèi)徑較小的(推薦內(nèi)徑0.15 mm以下)管路,并注意連接部分不要產(chǎn)生任何空隙。
?請按出峰寬對檢測器的反應(yīng)速度及數(shù)據(jù)處理設(shè)備上的數(shù)據(jù)采樣速度進行最優(yōu)化調(diào)整。特別是在 YMC-BioPro QA-F / SP-F的超高速分析上,為了能對應(yīng)保留時間短、狹窄的峰形,響應(yīng)值應(yīng)設(shè)定在0.5sec以下,數(shù)據(jù)采樣速度應(yīng)在10 points/sec以上。
?請?zhí)貏e注意連接時不要讓氣泡混入柱內(nèi)。
四、流動相和樣品溶劑
?在產(chǎn)品盒內(nèi)的附件COLUMN INSPECTION REPORT(檢測報告)中有標示,如果色譜柱需要長期保存的話請置換為此溶劑。一周內(nèi)再次使用的情況下,可在除去高濃度的鹽后,使用分析用流動相保存該色譜柱。
?出廠時的內(nèi)置溶劑:
YMC- BioPro QA /QA– F : 20 mM TRIS -HCl buffer (pH 8.1)
YMC- BioPro SP / SP – F : 20 mM sodium phosphate buffer (pH 6.8)
?使用時請按照色譜柱標簽上的箭頭方向來進行通液操作。請在色譜柱基本規(guī)格表中所表示的最大流速,最大壓力以下使用。由于壓力和流速的急劇變化會造成色譜柱的性能降低,因此請盡量避免發(fā)生。
?一般用20 ~ 50mM的緩沖液作為初期流動相使目標樣品吸附,通過鹽濃度梯度洗脫(一般把NaCl濃度在0 ~0.5M范圍內(nèi)調(diào)節(jié)上升)或PH梯度洗脫做到溶出分離。最終為了把流動相中沒有溶出而殘留在柱內(nèi)的雜質(zhì)去除掉,我們建議每次分析后使用含濃度為1M左右NaCl的緩沖液進行通液。
?水溶性有機溶劑最多可添加30%到洗脫液中。添加前請確認緩沖液中的鹽不會發(fā)生析出。另外,可添加作為蛋白質(zhì)的變性劑使用的尿素(小于8M)或鹽酸胍(小于6M)、非離子性界面活性劑、陽離子性界面活性劑(僅限QA/QA-F)和陰離子性界面活性劑(僅限SP / SP-F)等。
?請避免使用含有氧化劑的溶劑作為流動相。
?樣品請用和初期流動相相同組成的溶劑來進行溶解。在樣品溶液的含鹽濃度或pH值與流動相相異的情況下,會產(chǎn)生峰擴散及吸附量降低的現(xiàn)象。請事先通過脫鹽或稀釋處理,盡量與初期流動相的組成保持一致。
?為了防止篩板堵塞造成柱壓上升、色譜柱劣化,流動相以及樣品溶液都應(yīng)預(yù)先使用0.2 ~ 0.5um的薄膜濾器進行過濾。另外建議同時使用預(yù)柱過濾網(wǎng)(XRPRCS02) 進行過濾。
5. 離子交換色譜柱的清洗(發(fā)現(xiàn)柱效發(fā)生變化時)
由于樣品中的脂溶性物質(zhì)或溶解性小的物質(zhì)吸附在柱內(nèi),會使得保留時間、峰形發(fā)生變化,出現(xiàn)柱壓上升等現(xiàn)象。在此情況下,請按以下順序?qū)ιV柱進行清洗。如按此方法還是不能恢復(fù)色譜柱的性能,請更換新的色譜柱。
請先把流動相置換成附件COLUMN INSPECTION REPORT(檢測報告)中標示的檢查洗脫液(出廠時的保存溶劑)。
然后在流動相通液的情況下,通過進樣器按以下(1)到(4)的順序?qū)⑶逑慈軇└髯⑷?-5ml(使用≧2ml的定量環(huán)會較方便)。
清洗溶劑:
(1) 0.2M 氫氧化鈉水溶液/乙腈(80 / 20);
(2) 1M醋酸水溶液;
(3) 添加了非離子性界面活性劑的流動相(如0.02%Brij TM35);
(4) 添加了6M鹽酸胍的流動相。
每個溶劑清洗后,請確認保留時間及峰形是否恢復(fù)。
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