高效液相色譜常見問題及處理方法包含：柱壓，漏液，譜圖問題等，凱米斯科技為您提供完善解決方案。

一、柱壓

(一)柱壓過高

 柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。

1、拆去保護預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；

2、把YMC色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；

3、將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；

4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品結(jié)晶沉淀或含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題。

5、進樣閥損壞：清洗或更換進樣閥。

6、柱溫過低：提高溫度。

7、在線過濾器阻塞：清洗或更換在線過濾器。

8、流速設(shè)定過高：降低流速

9、壓力傳感器故障：更換壓力傳感器。

（二）柱壓過低

1、漏液：確定漏液位置并維修。

2、壓力傳感器損壞：更換壓力傳感器。

3、泵頭內(nèi)有空氣：溶劑脫氣、啟動泵抽出空氣。

4、流速設(shè)定過低：調(diào)整流速。

5、柱溫過高：降低溫度。

（三）壓力波動

1、流動相有溶解氣體；用超聲波脫氣15-30分鐘或用充氦氣脫氣

2、單向閥堵塞；取下單向閥，用超聲波在純水中超20分鐘左右，去處堵塞物

3、.泵密封損壞，造成壓力波動；更換泵密封

4、.系統(tǒng)存在漏液點；確定漏液位置并維修

5、柱后產(chǎn)生氣泡；流通池出液口加負壓調(diào)整器

6、使用梯度洗脫：由于流動相粘度的變化引起的壓力波動。

二、漏液

（一）接頭處漏液

1、接頭沒有擰緊；擰松后再緊，手緊接頭以手勁為限，不要使用工具，不銹鋼接頭先用手?jǐn)Q緊，再用專用扳手緊1/4-1/2圈，注意接頭中的管路一定要通到底，否則會留下死體積。

2、接頭被污染或磨損；建議更換接頭。

3、接頭不匹配，建議使用同一品牌的配件。

（二）泵漏液

1、單向閥松動：擰緊或更換單向閥。

2、接頭松動：擰緊接頭。

3、混合器密封損壞：更換混合器密封或更換混合器。

4、泵密封損壞：維修或更換泵密封件。

5、壓力傳感器損壞：維修或更換壓力傳感器。

6、脈沖阻尼器損壞：更換脈沖阻尼器。

7、比例閥損壞：檢查隔膜和手緊接頭，如果漏液立即更換。

8、放空閥損壞：擰緊放空閥，如果損壞，更換放空閥。

（三）進樣閥漏液

1、.轉(zhuǎn)子密封損壞；更換轉(zhuǎn)子密封。

2、.定量環(huán)阻塞；清洗或更換定量環(huán)。

3、進樣口密封松動；調(diào)整松緊度。

4、.進樣針頭尺寸不合適，一般是過短；使用恰當(dāng)?shù)倪M樣針（注意針頭形狀）。

5、廢液管中產(chǎn)生虹吸；清空廢液管。

6、廢液管阻塞：更換或疏通廢液管。

（四）高效液相色譜柱漏液

1、尾端接頭松動：擰緊接頭。

2、卡套內(nèi)有填料：拆下、清洗卡套、重新安裝。

3、篩板厚度不合適：使用合適的篩板。

（五）檢測器漏液

1、流通池墊片損壞：避免過大的背景壓力，更換墊片

2、流通池窗破碎：更換窗口。

3、手緊接頭漏液：擰緊或更換。

4、廢液管阻塞：更換廢液管。

5、流通池阻塞：更換。

三、譜圖問題

（一）峰拖尾

1、篩板阻塞：反沖色譜柱、更換進口篩板。

2、色譜柱塌陷：填充色譜柱。

3、.有干擾物質(zhì)的存在：使用更長的色譜柱、改變流動相或更換色譜柱。

4、流動相PH值不合適：調(diào)整PH值，對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰。

5、樣品與填料表面的活性點發(fā)生反應(yīng)：加入離子對試劑，比如流動相中有銨鹽的時適當(dāng)加大銨鹽的含量；加入堿性揮發(fā)性修飾劑，比如三乙胺然后用酸調(diào)節(jié)至原來的PH（建議用非揮發(fā)性的磷酸）。

6、流動相中加入適當(dāng)?shù)乃臍溥秽ǔ＜尤肓吭?%以內(nèi)即可。

7、酸性或堿性化合物的峰拖尾：使用濃度50-100mM的緩沖液；使用流動相PH等于PKa的緩沖液。
8、樣品過載：降低進樣量。

（二）峰前延

1、柱溫低：升高柱溫，最好不要超過40℃。

2、樣品溶劑選擇不當(dāng)：使用流動相作為樣品溶劑。

3、樣品過載：降低樣品含量。

4、色譜柱損壞：更換色譜柱。

5、流動相中緩沖鹽濃度不足：增加緩沖鹽濃度可以增加離子強度，減少因靜電的作用引起的前拖。

6、流動相中加入適當(dāng)?shù)乃臍溥秽ǔ＜尤肓吭?%以內(nèi)即可。

（三）峰分叉

1、保護柱或分析柱污染：取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質(zhì)污染，運用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。

2、樣品溶劑不溶于流動相：改變樣品溶劑，如果可能，用流動相作為溶劑。

（四）大峰變形

樣品過載：減少到合適的進樣量。

（五）早出的峰變形

1、進樣量不正確：減少進樣量。

2、樣品溶劑選擇不當(dāng)：用流動相做溶劑或者使用更弱的溶劑。

（六）早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

柱外效應(yīng)：使用更短、內(nèi)徑更小的管路；使用小體積的流通池。

（七）K’增加時，拖尾更嚴(yán)重

1.反相模式，二級保留效應(yīng):.加入三乙胺（堿性樣品）；加入乙酸（酸性樣品） ；加入鹽或緩沖劑（離子樣品）；更換一根柱子。

2、正湘模式，二級保留效應(yīng)：加入三乙胺（堿性樣品）；加入乙酸（酸性樣品） ；加入水；

3、離子對，二級保留效應(yīng)：加入三乙胺（堿性樣品）。

（八）額外的峰
1、前一次進樣的洗脫峰：提高流速；增加運行時間或梯度斜率。

2、倒峰或鬼峰：檢查流動相是否純凈；使用流動相作為溶劑；減少進樣體積。

（九）保留時間波動及突然變化

1、溫控不當(dāng)；調(diào)節(jié)好柱溫。

2、流動相組分變化；防止流動相蒸發(fā)、反應(yīng)等，做梯度時尤其要注意流動相混合的均勻

3、色譜柱沒有平衡；在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。

4、流速變化：重新設(shè)定流速。

5、泵中有氣泡：從泵中除去氣泡。

6、流動相選擇不當(dāng)：更換合適的流動相。

（十）基線漂移

1、柱溫波動：控制好柱子和流動相的溫度。

2、流動相不均勻：使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑，流動相在使用前進行脫氣。

3、檢測器內(nèi)流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池

4、檢測器出口阻塞：去除阻塞物或更換管子。

5、流動相配比不當(dāng)或流速變化：更改配比或流速。

6、樣品中有強保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線：使用保護住，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。

7、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處：將波長調(diào)整至最大吸收波長處。

（十一）分離度降低

1、流動相污染或變質(zhì)（引起保留時間的變化）：重新配置流動相。

2、保護柱或分析柱阻塞：取下保護住再分析，也可更換保護住，若是分析柱堵，拆下來清洗，如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物污染，也可能是入口處堵，可以更換篩板或色譜柱。

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