高效液相色譜柱的儲(chǔ)存液無(wú)特殊說(shuō)明，均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意液相色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。

高效液相色譜柱再生與注意事項(xiàng)：

1、高效液相色譜柱使用的時(shí)候注意事項(xiàng)：

高效液相色譜柱的儲(chǔ)存液無(wú)特殊說(shuō)明，均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意高效液相色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。

在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10 %左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。

2、流動(dòng)相：

流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。

如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm 的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。

以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的 PH 值適用范圍是 2.0-8.0 ，C18 適合于堿性化合物， PH值適用范圍為 2.0-10.0 。

當(dāng)必須要在 PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。

3、樣品：

樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱( SPE)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。

色譜柱的保存

1、長(zhǎng)期保存色譜柱：

如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中，并將購(gòu)買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度最好是室溫。

2、反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：

使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用 10% 的甲醇 / 水沖洗 30 分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗 30 分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入 10% 的甲醇，防止將填料沖塌陷。

色譜柱的再生

因?yàn)樯V柱是消耗品，隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，會(huì)出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來(lái)說(shuō)可能是柱效下降。

1、正相柱的再生 ： 依次以 20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。

2、反相柱的再生 ： 依次采用 20-30 倍的色譜柱體積的甲醇：水 =10 ： 90 ( V/V)，乙腈，異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。

色譜柱在使用過(guò)程中易出現(xiàn)的問(wèn)題和解決辦法

色譜柱在使用中最常見(jiàn)的問(wèn)題就是柱壓升高，如果柱壓是在長(zhǎng)時(shí)間使用過(guò)程中緩慢增加，屬于正?，F(xiàn)象。但柱壓在使用過(guò)程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外)，可能的原因有如下幾點(diǎn)：

a、色譜柱頭的過(guò)濾篩板堵塞或污染;

b、色譜柱頭的填料被樣品污染;

c、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出;

d、流動(dòng)相 PH 值過(guò)大或過(guò)小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。

解決辦法如下：

a、如確定是色譜柱頭的過(guò)濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在 10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗 10 分鐘，后再用純水超聲 10 分鐘，重新裝入色譜柱。

b、如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。

c、如確定定是鹽結(jié)晶，用 10% 的甲醇 / 水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。

d、如果因 PH 值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)。

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